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PCR之原理與應用
作者
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出版日期
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2023/06/01
閱讀格式
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PDF
ISBN
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9786263661264
聚合酶鏈鎖反應（polymerase chain reaction; PCR）是一個被高度依賴、且被普遍應用的分子生物學技術，它可以將一特定DNA片段（或基因）由構造複雜的染色體或其他DNA來源（或樣品）中大量增幅出來。這就好像是一個超炫的戲法，可以由一堆如山的黃沙中，將其內所埋藏的幾顆金沙子篩選出來，並且複製成幾百萬顆金沙。如此，不但可以證明沙堆中確有金沙子的存在，並可以因此獲得大量的金沙。換句話說，PCR是一個分析型（analytical）也是一個製備型（preparative）的研究工具，它不但可以藉由強效的增幅機制，來偵測一個DNA樣品中是否含有某一特定DNA片段（或基因），而且藉由增幅可以大量製取（有時也可加以修飾）此DNA片段，以作為多種生技應用研究之材料，例如DNA 定序、基因選殖、重組蛋白表現等。此項技術可說是現今分子生物學研究中最重要的分析工具之一，同時也是多數從事生物醫學、分子遺傳分析、及基因診斷等相關領域研究所不可或缺的技術。
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PART 1 聚合酶鏈鎖反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）之緣起與原理
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第1章 PCR發展之背景與歷史（Historical Background of PCR Development）
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1-1 PCR：一個二十世紀分子生物學研究的突破性技術
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1-2 PCR技術的發展簡史
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第2章 典型PCR的反應成分與條件設定（Recipe and Condition Setup for a Typical PCR）
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2-1 典型的PCR反應成分
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2-2 典型的PCR反應條件
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2-3 循環增幅的細節（Details of Cycling Amplification）
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2-4 PCR偵測實驗的對照組
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第3章 PCR的產率與專一性（Sensitivity and Specificity of PCR）
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3-1 PCR反應可能遭遇的問題與改進方法
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3-2 PCR反應抑制劑
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3-3 增進PCR產率與專一性的試劑
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3-4 調整PCR的方法來增進產率或專一性
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3-5 長片段與富含GC（GC-Rich）的DNA片段之PCR增幅
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第4章 PCR增幅的忠誠性（Fidelity of PCR Amplification）
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4-1 PCR的錯誤率（或忠誠性）對我們的研究有何影響?
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4-2 聚合酶加入錯誤核苷酸的機制
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4-3 影響PCR忠誠性的因素
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PART 2 PCR之基礎應用（Basic Applications of PCR）
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第5章 逆向PCR與連接反應媒介PCR（Inverse PCR，IPCR and Ligation Mediated PCR，LMPCR）
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5-1 IPCR對未知序列之增幅
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5-2 IPCR應用於刪除突變與定點突變之基因建構
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5-3 以連接反應媒介PCR（LMPCR）來進行未知序列之增幅
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5-4 LMPCR指紋分析（LMPCR Fingerprinting Analysis）
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5-5 以LMPCR進行DNA胞內腳紋（In Vivo Footprinting）分析
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第6章 多重引子PCR（Multiplex PCR，mPCR）與巢狀PCR（Nested PCR）
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6-1 多重引子PCR（Multiplex PCR，mPCR）
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6-2 巢狀PCR（Nested PCR）
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第7章 反轉錄PCR（Reverse Transcription PCR，RT-PCR）
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7-1 RT-PCR的用途
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7-2 RT-PCR的基本步驟
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7-3 反轉錄酶的特性與選擇
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7-4 單一步驟或兩步驟RT-PCR
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7-5 RT-PCR常用於分析特定基因之差異性表現
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第8章 定量PCR與即時PCR（Quantitative PCR and Real-Time PCR）
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8-1 早期定量PCR是一種終端PCR（End-Point PCR）的分析方式
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8-2 新一代的定量PCR：即時PCR（Real-Time PCR）
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8-3第三代的核酸PCR定量：數字PCR（Digital PCR）dPCR
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第9章 應用PCR做全基因體差異性分析（Genomic Variation Analysis by PCR）
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9-1 RAPD：隨機增幅多型性DNA（Random Amplified Polymorphic DNA）
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9-2 AFLP：增幅片段長度多型性分析（Amplify Fragment Length Polymorphysm）
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9-3 IRS-PCR：散布性重複序列PCR（Interspersed Repeat Sequence PCR）
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9-4 STR-PCR：短而連續重複序列PCR（Short Tandem Repeat PCR）
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9-5 CODIS：組合式DNA指標系統（Combined DNA Index System）
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第10章 PCR於基因選殖之應用（PCR Mediated Gene Cloning）
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10-1 T/A（或稱A/T）選殖（T/A cloning）
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10-2 利用PCR將目標DNA兩側加入選殖所需特定限制性內切酶之辨識序列
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10-3 不需使用連接酶或限制性酵素的特殊PCR基因選殖
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10-4 使用Degenerate 引子的PCR與基因建構
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10-5 利用PCR來製備單股目標基因（或DNA）
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第11章 利用PCR偵測基因變異（Mutation Detection by PCR）
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11-1 已知突變點與突變方式之PCR偵測
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11-2 特定基因中之未特定突變點（或突變樣式）之PCR相關偵測
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第12章 利用PCR來創造突變（PCR Mediated Mutagenesis）
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12-1 利用PCR做定點突變（PCR Mediated Site-Directed Mutagenesis）
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12-2 以兩步驟PCR方法來製備一長片段插入性突變（Two-Step PCR Method for Making a Long Insertion Mutant）
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12-3 連接子掃描突變（Linker Scanning Mutagenesis，LSM）
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12-4 利用PCR進行隨機突變（PCR Mediated Random Mutagenesis）
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第13章 結語
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